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    這樣做,會大大減少IHC背景信號

    來源: Cell Signaling Technology (CST)   2020-4-16   訪問量:778評論(0)

    當對小鼠樣本進行 IHC 實驗時,CST 更推薦您使用兔單克隆抗體而不是鼠單克隆抗體,為什么,這么做有什么好處?3 步讓您了解原因!


    使用小鼠單克隆抗體會造成小鼠組織結果無法解讀

    如經適當驗證,小鼠單克隆抗體會特異性地對目的靶標染色,但數據解讀很可能因使用抗小鼠 IgG 檢測試劑(二抗)同時能檢測內源性小鼠 IgG 而受到影響。如圖1,依次使用一種 α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)小鼠單克隆抗體和一種抗小鼠 IgG 檢測試劑對石蠟包埋的小鼠肺細胞進行免疫組織化學 (IHC) 分析,結果顯示出預期的特異性染色,但由于存在抗小鼠 IgG 二抗,還顯示出背景染色過度。避免小鼠 IgG 背景的唯一辦法是在你的實驗步驟中添加費力的步驟,或換用一種非嚙齒類抗體,例如聯合使用兔單克隆抗體和抗兔 IgG 的二抗。

    圖1 ,注:小鼠 IgG 二抗導致背景染色過度。

     

    抗小鼠 IgG 二抗會造成小鼠抗小鼠背景染色

    使用小鼠一抗需要抗小鼠 IgG 二抗或檢測試劑,這同時會對一抗和小鼠組織樣品的 IgG 蛋白進行染色。為了讓您直觀地觀察,圖2展示的是在沒有一抗的情況下,使用 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Mouse) #8125 對石蠟包埋的小鼠肺細胞進行 IHC 分析。

     

    圖2 ,注:小鼠 IgG 二抗導致背景染色過度。


     

    兔單克隆抗體無需額外的實驗步驟即可產生可解讀的小鼠組織結果

    使用在小鼠組織中經 IHC 驗證的兔單克隆一抗可克服小鼠抗小鼠染色,并發現明確且可解讀的結果。圖3 所示的是使用 α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb #19245 對石蠟包埋的小鼠肺細胞進行的 IHC 分析。

     

    圖3,注:使用兔單克隆抗體和抗兔IgG檢測即可避免背景過度染色。


    若您正在使用來自CST的可用于IHC實驗的兔單克隆抗體進行實驗,不用擔心背景染色過度的問題。

    在小鼠組織中進行過 IHC 驗證的部分兔單克隆抗體

     

    產品名稱

    貨號

    應用

    反應性

    細胞生物學

    Bax (D3R2M) Rabbit mAb (Rodent Preferred)

    14796

    WB、IP、IHC-P

    M、R

    N-Cadherin (D4R1H) XP® Rabbit mAb

    13116

    WB、IP、IHC-P、IF-IC

    H、M

    CD44 (E7K2Y) XP® Rabbit mAb

    37259

    WB、IHC-P

    H、M、R

    EGF Receptor (D1P9C) Rabbit mAb (Mouse Preferred)

    71655

    WB、IP、IHC-P、 IF-F、IF-IC、F

    M

    EpCAM (E6V8Y) XP® Rabbit mAb (Mouse Preferred)

    93790

    WB、IP、IHC-P

    H、M、R

    HER3/ErbB3 (D22C5) XP® Rabbit mAb

    12708

    WB、IP、IHC-P、 IF-IC、F

    H、M、(R)

    Integrin ß3 (D7X3P) XP® Rabbit mAb

    13166

    WB、IHC-P

    H、M

    Keratin 5 (E2T4B) XP® Rabbit mAb (IHC Preferred)

    71536

    IHC-P

    H、M

    Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb (Mouse Preferred; IHC Formulated)

    12202

    IHC-P

    M

    Olfm4 (D6Y5A) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

    39141

    WB、IP、IHC-P、IF-F

    M

    Cleaved PARP (Asp214) (D6X6X) Rabbit mAb (Rodent Specific)

    94885

    WB、IP、IHC-P、 IF-IC、F

    M、R

    PCNA (D3H8P) XP® Rabbit mAb

    13110

    WB、IP、IHC-P、IF-F、 IF-IC、F

    H、M、R、Mk

    Perforin (E3W4I) Rabbit mAb

    31647

    WB、IHC-P

    M

    α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb

    19245

    WB、IP、IHC-P、IF-F

    H、M、R

    Vinculin (E1E9V) XP® Rabbit mAb

    13901

    WB、IHC-P、F

    H、M、R、Mk

    發育生物學

    Non-phospho (Active) β-Catenin (Ser45) (D2U8Y) XP® Rabbit mAb

    19807

    WB、IP、IHC-P、IF-F、 IF-IC、F

    H、M、R、Mk、 Z、Dg

    HES1 (D6P2U) Rabbit mAb

    11988

    WB、IP、IHC-P

    H、M、R、Mk

    SMAD4 (D3R4N) XP® Rabbit mAb

    46535

    WB、IP、HC-P、IF-IC、 F、ChIP、ChIP-seq

    H、M、R、Mk

    Sox9 (D8G8H) Rabbit mAb

    82630

    WB、IHC-P、IF-IC、F

    H、M、(M、R)

    YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb

    14074

    WB、IP、HC-P、IF-IC、 F、ChIP、ChIP-seq

    H、M、R、Hm、 Mk、(B、Hr)

    表觀遺傳學

    ARID1A/BAF250A (D2A8U) Rabbit mAb

    12354

    WB、IHC-P、ChIP

    H、M、R、Mk

    EED (E4L6E) XP® Rabbit mAb

    85322

    WB、IP、IHC-P、IF-IC、 F、ChIP

    H、M、R、Mk

    Glucocorticoid Receptor (D6H2L) XP® Rabbit mAb

    12041

    WB、IP、HC-P、IF-IC、 F、ChIP、ChIP-seq

    H、M、R、Mk

    代謝

    Phospho-AMPKα (Thr172) (D4D6D) Rabbit mAb

    50081

    WB、IP、IHC-P

    H、M、R、C、Z、 B、Pg)

    Arginase-1 (D4E3MTM ) XP® Rabbit mAb

    93668

    WB、IHC-P、IF-F、 IF-IC、F

    H、M、R

    COX IV (D6I4K) Rabbit mAb (Rodent Specific)

    38563

    WB、IP、IHC-P

    M、R

    SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific)

    23214

    WB、IP、IHC-P、IF-IC

    M、R

    神經科學

    Adora2a/Adenosine Receptor A2a (E5I8X) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific)

    94871

    IHC-P、IF-F

    M、R

    GFAP (E4L7M) XP® Rabbit mAb

    80788

    WB、IHC-P、IF-F

    H、M、R

    Myelin Basic Protein (D8X4Q) XP® Rabbit mAb

    78896

    WB、IHC-P、IF-F、IF-IC

    H、M、R

    NCAM1 (CD56) (E7X9M) XP® Rabbit mAb

    99746

    WB、IP、IHC-P、IF-F、 IF-IC、F

    H、M、R

    NeuN (D4G4O) XP® Rabbit mAb

    24307

    WB、IHC-P、IF-F

    H、M、R

    Tau (D1M9X) XP® Rabbit mAb

    46687

    WB、IHC-P、IF-F、IF-IC

    H、M、R

    免疫學

    Btk (D3H5) Rabbit mAb

    8547

    WB、IP、IHC-P、F

    H、M、(R、Hm、B、Dg、Pg、Hr)

    CD3ε (D4V8L) Rabbit mAb

    99940

    WB、IHC-P

    M

    CD4 (D7D2Z) Rabbit mAb

    25229

    WB、IHC-P

    M、R

    CD8α (D4W2Z) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

    98941

    WB、IHC-P

    M

    CD11c (D1V9Y) Rabbit mAb

    97585

    WB、IHC-P、IF-F、IF-IC

    M

    CD19 (D4V4B) XP® Rabbit mAb

    90176

    WB、IP、IHC-P

    H、M、(B)

    CD31 (PECAM-1) (D8V9E) XP® Rabbit mAb

    77699

    WB、IHC-P

    M

    CD39/NTPDase 1 (E2X6B) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

    14481

    WB、IHC-P

    M

    CD40 (E2Z7J) Rabbit mAb

    86165

    WB、IP、IHC-P

    M

    CD45 (D3F8Q) Rabbit mAb

    70257

    P、IHC-P、IF-F、IF-IC

    M

    F4/80 (D2S9R) XP® Rabbit mAb

    70076

    WB、IP、IHC-P

    M

    Granzyme B (E5V2L) Rabbit mAb (Mouse Specific)

    44153

    WB、IP、IHC-P、F

    M

    FoxP3 (D6O8R) Rabbit mAb

    12653

    IHC-P、IF-F、F

    M

    FcγRIIB (D8F9C) XP® Rabbit mAb(Mouse Specific)

    96397

    WB、IP、IHC-P、F

    M

    NT5E/CD73 (D7F9A) Rabbit mAb

    13160

    WB、IHC-P

    H、M、R

    PD-1 (D7D5W) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

    84651

    WB、IP、IHC-P、IF-F、IF-IC、F

    M、(R、Hm)

    PD-L1 (D5V3B) Rabbit mAb (Mouse Specific; IHC Specific)

    64988

    IHC-P

    M

    PD-L2 (D6L5A) Rabbit mAb

    49189

    IHC-P

    M

    S100A9 (D3U8M) Rabbit mAb (Rodent Specific)

    73425

    WB、IP、IHC-P、 IF-F、F

    M、R

    STING (D2P2F) Rabbit mAb

    13647

    WB、IP、IHC-P

    H、M

    TIM-3 (D3M9R) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)

    83882

    WB、IP、IHC-P

    M

    VCAM-1 (D2T4N) Rabbit mAb (Mouse Specific)

    32653

    WB、IHC-P

    M

     

    請訪問 cst-science.com/mouse-IHC,了解詳細的實驗步驟,包括特定產品的 Leica® BOND™ 實驗步驟。

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